根據(jù)反應(yīng)機(jī)理的不同又可將鱟試驗(yàn)法分為以凝膠的形成作為指標(biāo)的凝膠法,以凝膠的濁度變化作為指標(biāo)的比濁法以及顯色合成基質(zhì)水解顯色作為指標(biāo)的比色法,其中以定性的凝膠法收載最為普通(表3)。
根據(jù)反應(yīng)機(jī)理的不同,主要可分為以下幾類:
(1)凝膠法(Gel-Clot technique):可在0.03Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行半定量測定。
(2)比濁法(Turbidimetric Assay):通常在0.006 ~ 300Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行定量。
(3)比色法(Colorimetric Assay):操作比較復(fù)雜,但靈敏度和精確度高。通常在0. 006~15Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行定量。
(4)ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay):用鱟試劑與酶聯(lián)吸附免疫測定法聯(lián)合檢定微量內(nèi)毒素的方法。
(5)以巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞分裂素(Cytodines):作為機(jī)體反應(yīng)指標(biāo)的熱原檢查系統(tǒng)。
凝膠法:即在100 x 75mm的小試管內(nèi),加入待檢樣品的鱟試劑混合。37℃60分鐘保溫反應(yīng)后,180°倒轉(zhuǎn),根據(jù)凝膠形成的有無作為判定指標(biāo)的一種半定量法。此法操作比較簡單、經(jīng)濟(jì),而且不需要專用測定儀器??稍?/span>0.03Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行半定量測量。
比濁法:根據(jù)內(nèi)毒素與鱟試劑的(C因子)反應(yīng)機(jī)理,被激活的凝固酶切斷凝固蛋白原中特定位置的精氨肽鏈。形成凝固蛋白,產(chǎn)生凝膠的濁度變化,適當(dāng)?shù)臐岫葴y定儀進(jìn)行定量的一種方法??煞譃?/span>Endopoint Assay和Kinetic turbidimetric Assay。此法操作簡單、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高、檢測范圍廣。通常在0. 006~300ET/ml的范圍同時(shí)進(jìn)行定量。但需要專用儀器。
比色法:根據(jù)被內(nèi)毒素激活的凝固酶水解鱟三肽中精氨酸肽鏈。釋放出對硝基苯胺(PNA黃色A405nm)用冰醋酸中止反應(yīng)進(jìn)行吸光度測定,或用游離的PNA和偶氮試劑反應(yīng),最終形成偶氮藍(lán)復(fù)合物顯色(紅色A 545nm)而進(jìn)行比色測定的一種方法??煞譃?/span>Endopoint Assay和Kinetic turbidimetricAssay。此法操作比較復(fù)雜。但靈敏度、定量性和精度都高。通常在0. 006 ~15Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行定量,而且更微量的內(nèi)毒素也可定量。目前主要用在血液﹑體液中的微量內(nèi)毒素的測定方面。